Analiza elektroforetyczna w żelu z gradientem denaturującym ludzkiego protoonkogenu cHa-ras1
Adam
- 0
Aktywacja protoonkogenów ras często obejmuje mutacje punktowe w różnych miejscach genu. W tym miejscu opisujemy zastosowanie elektroforezy żelowej z gradientem denaturującym do identyfikacji i scharakteryzowania takich mutacji w protoonkogenie cHa-ras1. Obliczyliśmy mapę topnienia genu cHa-ras1 i zaprojektowaliśmy optymalne warunki do oddzielenia mutantów od sekwencji typu dzikiego w pierwszym eksonie .
Jako przykład zbadaliśmy mutację punktową T24 z guanozyny na tymidynę w pierwszym eksonie, która została znaleziona w komórkach raka pęcherza moczowego T24. Analiza w żelu gradientowym denaturującym zarówno cząsteczek homodupleksowych, jak i heterodupleksowych spowodowała oddzielenie sekwencji typu dzikiego od sekwencji zmutowanej. Na podstawie mapy topnienia przedstawiamy ogólny schemat skriningu sekwencji protoonkogenu cHa-ras1 pod kątem występowania mutacji punktowych.
Antygen EpCAM związany z rakiem indukuje glioksalazę 1, co skutkuje zwiększonym obrotem metyloglioksalem.
Cząsteczka adhezyjna komórek nabłonka (EpCAM) jest homofilną cząsteczką adhezyjną, ulegającą ekspresji de novo na różnych nowotworach nabłonkowych. Nadekspresja EpCAM skutkuje zwiększoną proliferacją i szybką indukcją proto -onkogenu c-myc. Nowatorska elektroforeza żelowa z różnicą fluorescencji oparta na proteomice (technologia DIGE) została wykorzystana do zbadania wpływu EpCAM na proteom ludzkich komórek nabłonka. identyfikacja pięciu białek o znacząco zmienionej regulacji w zakresie od -1,3 do +5,8-krotnie. Jedno ze zidentyfikowanych białek, a mianowicie glioksalaza 1, doświadczyło zmiany punktu izoelektrycznego z pH 5,2 na 5,0 po ekspresji EpCAM .
To przesunięcie korelowało ze wzrostem aktywności enzymatycznej glioksalazy 1, co skutkuje zwiększonym obrotem metyloglioksalu. Pokazujemy potencjał technologii DIGE do szybkiej i ilościowej analizy proteomów pod kątem zmienionych poziomów ekspresji i, co ważne, modyfikacji potranslacyjnych. Ponadto opisujemy nowe cele antygenu raka EpCAM, w tym glioksalazę1.
Różnicowa ekspresja białek surowicy w szpiczaku mnogim.
Dokładna przyczyna szpiczaka mnogiego (MM) nie została w pełni wyjaśniona, a mediana przeżycia choroby bez żadnego leczenia wynosi 6 miesięcy. Aby zidentyfikować potencjalne biomarkery MM, białka surowicy odzwierciedlające zmiany w ich proteomach zostały przeanalizowane u 6 pacjentów z MM w porównaniu z 6 zdrowymi osobami z grupy kontrolnej przy użyciu elektroforezy dwuwymiarowej (2-DE) i spektrometrii mas z desorpcją/jonizacją laserową wspomaganą matrycą czasu przelotu .
Najbardziej godne uwagi białka o zróżnicowanej ekspresji potwierdzono metodą immunoblottingu, a zmiany w ekspresji mRNA oceniono za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-qPCR). W sumie znaleziono 11 plamek białkowych o zróżnicowanej ekspresji. Poziomy ekspresji 7 białek [stała ciężka immunoglobuliny µ; chłoniak rozlany protoonkogenu z komórek B (DBL2); podjednostka regulatorowa 4 proteazy 26S (P26s4); albumina surowicy; haptoglobina; oraz dwa nieznane białka z punktem izoelektronicznym (pI) 6,41 i masą cząsteczkową 35,4 kDa i pI odpowiednio 8,05 i masą cząsteczkową 27,4 kDa] były obniżone w MM w porównaniu ze zdrowymi kontrolami.
Ekspresja podjednostki kompleksu 1A białka 2/3 związanego z żelem aktyny (ARPC1A); stała ciężka immunoglobuliny γ1; fragment D łańcucha a fibrynogenu (FGA); a białko palca cynkowego 70 było zwiększone w surowicy pacjentów z MM. Ekspresję białek ARPC1A, FGA, P26s4 i DBL2 zmierzono metodą immunoblottingu w niezależnej kohorcie 12 pacjentów z MM i 10 zdrowych osób z grupy kontrolnej. Analiza RT-qPCR wykazała, że ekspresja ARPC1A tylko naśladowała ekspresję białka, podczas gdy FGA, PSMC1 (kodujący P26s4) i MCF2 (kodujący DBL2) nie wykazywały istotnych zmian w ekspresji mRNA między próbkami kontrolnymi i MM. Białka te stanowią przypuszczalne biomarkery serologiczne dla pacjentów z MM.

Mechanizm adsorpcji dsDNA na nanocząstkach złota stabilizowanych cytrynianem oraz kolorymetryczna i wizualna metoda wykrywania mutacji punktowej V600E genu BRAF.
Przedstawiono badanie dotyczące kinetyki wiązania i mechanizmu adsorpcji dsDNA na nanocząstkach złota (AuNPs) pokrytych cytrynianem. Metody obejmują miareczkowanie fluorescencyjne, miareczkowanie metodą kalorymetrii izotermicznej (ITC), dynamiczne rozpraszanie światła i elektroforezę żelową . Stwierdzono, że fluorescencja sondy DNA (znakowana zieloną rodaminą i mierzona przy pikach wzbudzenia/emisji 498/531 nm) jest wygaszona przez dodanie AuNP. Stała wygaszania Sterna-Volmera (Ksv) wynosi 1,67 × 10^9 L·mol-1 przy 308 K i spada wraz ze wzrostem temperatury. Mechanizm hartowania jest głównie statyczny.
Wyniki zarówno miareczkowania fluorescencji, jak i ITC wykazują ujemne wartości dla wartości ΔH i ΔS. Pokazuje to, że indukowane jonami oddziaływania dipol-dipol są głównymi siłami przyciągania między dsDNA i AuNP, podczas gdy oddziaływania elektrostatyczne powodują odpychanie. Siły odpychające prowadzą do mniejszego powinowactwa między dsDNA i AuNP (w porównaniu z jednoniciowym DNA). Stwierdzono również, że dsDNA może zapobiegać agregacji AuNP, której towarzyszy zmiana koloru z czerwonego na niebieski.
Granica wykrywania wzrokowego gołym okiem dla dsDNA1 wynosi 36 pM. Na podstawie tych ustaleń opracowano metodę kolorymetryczną do wykrywania protoonkogenu mutacji punktowej kinazy białkowej serynowo/treoninowej B-Raf V600E w liniach komórkowych HT29, Ec109, A549, Huh-7 i SW480. Graficzny streszczenie Schemat indukowanej solą agregacji nieosłoniętych nanocząstek złota (AuNP), która prowadzi do zmiany koloru z czerwonego na niebieski. Jeśli AuNP są pokryte dsDNA, agregacja jest tłumiona.
Wydajność półprzewodnikowego hybrydowego urządzenia magazynującego energię przy użyciu nanokompozytu Ni/NiO o zredukowanej zawartości tlenku grafenu
Zbadano wpływ stosunku molowego (azotan niklu/kwas cytrynowy) na powstawanie produktów końcowych zol- żel . Utworzona nanocząstka Ni/NiO została zakotwiczona w zredukowanym tlenku grafenu (rGO) za pomocą sonikacji sondy. Stwierdzono, że próbka uzyskana ze stosunku molowego (1:1) jon niklu:kwas cytrynowy (Ni2+:CA) skutkowała wysoką pojemnością właściwą wynoszącą 158°C/g wśród wszystkich badanych stosunków (Ni2+:CA). Dzięki zakotwiczeniu Ni/NiO na rGO uzyskano zwiększoną pojemność właściwą do 335 C/g wraz z poprawioną stabilnością cyklu, wysoką wydajnością i wydajnością kulombowska.
Wysoka przewodność i zwiększona powierzchnia wydawały się być odpowiedzialne za lepsze parametry elektrochemiczne nanokompozytu Ni/NiO@rGO. Półprzewodnikowe hybrydowe urządzenie do magazynowania energii składające się z Ni/NiO@rGO (NR2) jako elektrody dodatniej i rGO jako elektrody ujemnej wykazywało zwiększoną gęstość energii i mocy. Oświetlenie LED zademonstrowano przy użyciu trzech prototypowych urządzeń hybrydowych (NR2(+)||rGO(-)) połączonych szeregowo.
Rola izoenzymu M2 kinazy pirogronianowej w powstawaniu nowotworów nabłonka dróg moczowych.
Przekształcenie zmian przedrakowych w pełnowartościowe nowotwory wymaga, aby dotknięte nią komórki przekroczyły pewne etapy ograniczające szybkość. Niedawno wykazaliśmy, że aktywacja protoonkogenu HRAS w komórkach urotelialnych myszy transgenicznych powoduje prosty przerost urotelialny (SUH), który jest uporczywy i którego przejście do raka brodawkowatego urotelialnego o niskim stopniu złośliwości (UC) musi przejść guzkowy przerost urotelialny (NUH). Postawiliśmy hipotezę, że NUH, który nabył rdzenie włóknisto-naczyniowe, odgrywa kluczową rolę w sygnalizacji mezenchymalnej do nabłonkowej, naruszając bariery inicjacji nowotworu urotelialnego.
1L ProtoGel (30%) |
|||
NAT1260 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 135.66 EUR |
1L ProtoGel (40%) |
|||
NAT1264 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 161.88 EUR |
1L ProtoGel Resolving Buffer |
|||
NAT1268 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 78.66 EUR |
Corning Reagent Bottle 1L PP |
|||
1500P-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 118.56 EUR |
BEAKER,1L,PLASTIC,LOW FORM,PP,6/6 |
|||
1000P-1L | CORNING | 6/pk | 75.6 EUR |
BEAKER,1L,PLASTIC,LOW FORM,PFA,1/6 |
|||
1003P-1L | CORNING | 1/pk | 783.6 EUR |
BEAKER,1L,WITH HANDLE AND SPOUT,PP,12/12 |
|||
1015P-1L | CORNING | 12/pk | 139.2 EUR |
Diss Media Conc Hydrochloric Acid 0.01N (1L to 40L) |
|||
DBC10-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
Diss Media Conc Hydrochloric Acid 0.1N (1L to 40L) |
|||
DBC11-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
Diss Media Conc K Phosph pH 6.0 (1L to 40L) |
|||
DBC02-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
Diss Media Conc K Phosph pH 7.2 (1L to 40L) |
|||
DBC04-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
Diss Media Conc K Phosph pH 7.5 (1L to 40L) |
|||
DBC05-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
Diss Media Conc Na Lauryl Sulphate 0.50% (1L to 20L) |
|||
DBC07-1L | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 82.08 EUR |
Diss Media Conc K Phosph pH 8.0 (1L to 40L) |
|||
DBC42-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
450ML ProtoGel (30%) |
|||
NAT1258 | Scientific Laboratory Supplies | 450ML | 82.08 EUR |
450ML ProtoGel (40%) |
|||
NAT1262 | Scientific Laboratory Supplies | 450ML | 110.58 EUR |
Diss Media Conc K Phosph pH 4.5 (1L of to 40L) |
|||
DBC40-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
Diss Media Conc K Phosph pH 7.1 (1L of to 40L) |
|||
DBC41-1L | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 449.16 EUR |
CYLINDER,GRAD,1L,PLASTIC,SINGLE METRIC SCALE,PP,TC W/FUNNEL,1/6 |
|||
3022P-1L | CORNING | 1/pk | 193.2 EUR |
VOL FLASK,1L,PLASTIC,CLASS A,PMP,24/29 TAPERED PP STOPPER,1/3 |
|||
5640P-1L | CORNING | 1/pk | 159.6 EUR |
VOL FLASK,1L,PLASTIC,CLASS B,PP,24/29 TAPERED PP STOPPER,1/3 |
|||
5641P-1L | CORNING | 1/pk | 145.2 EUR |
ProtoGel Sample Prep Kit |
|||
NAT1248 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 183.54 EUR |
200ML ProtoGel Stacking Buffer |
|||
NAT1270 | Scientific Laboratory Supplies | 200ML | 36.82 EUR |
450ML ProtoGel Resolving Buffer 4X |
|||
NAT1266 | Scientific Laboratory Supplies | 450ML | 46.4 EUR |
100ML ProtoGel Quick-Cast 12% |
|||
NAT1272 | Scientific Laboratory Supplies | 100ML | 52.33 EUR |
450ML ProtoGel Quick-Cast 12% |
|||
NAT1274 | Scientific Laboratory Supplies | 450ML | 183.54 EUR |
SDS-Blue™ - Coomassie based solution for protein staining in SDS-PAGE |
|||
04-GSB | Gentaur Genprice |
|
|
1L Hanna pH 6.86 buffer 1L |
|||
HI70061L | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 29.64 EUR |
Percoll 1L |
|||
17089101 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 425.22 EUR |
1L HarrisHematoxylin |
|||
NAT1338 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 100.32 EUR |
1L Autofluor |
|||
NAT1446 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 223.44 EUR |
Sharpsbin 1L |
|||
SAF7352 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 3.42 EUR |
SLINGSHOT-1L Antibody |
|||
48407-100ul | SAB | 100ul | 399.6 EUR |
SLINGSHOT-1L Antibody |
|||
48407-50ul | SAB | 50ul | 286.8 EUR |
SLINGSHOT-1L Antibody |
|||
abx016133-100ug | Abbexa | 100 ug | 493.2 EUR |
SLINGSHOT-1L Antibody |
|||
abx224128-100ug | Abbexa | 100 ug | 493.2 EUR |
Beaker Brushes, 1L |
|||
BR007-1K | Bio Basic | 1 UNIT | 64.18 EUR |
1L-chiro-Inositol |
|||
GC7626-100MG | Glentham Life Sciences | 100 mg | 122.4 EUR |
1L-chiro-Inositol |
|||
GC7626-1G | Glentham Life Sciences | 1 g | 322.8 EUR |
Dermcidin-1L (human) |
|||
H-7316.0500 | Bachem | 0.5mg | 212.4 EUR |
Dermcidin-1L (human) |
|||
H-7316.1000 | Bachem | 1.0mg | 352.8 EUR |
Percoll Plus 1L |
|||
17544501 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 641.82 EUR |
Sepharose 6B 1L |
|||
17011001 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 918.84 EUR |
Sepharose 4B 1L |
|||
17012001 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 918.84 EUR |
Beaker 1L SSteel |
|||
BEA3328 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 104.88 EUR |
1L Flask Clamp |
|||
MIX1332 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 30.78 EUR |
1L Tween 20 |
|||
NAT1084 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 124.26 EUR |
1L ProtoBlue Safe |
|||
NAT1108 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 112.86 EUR |
1L ProtoStain Blue |
|||
NAT1112 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 118.56 EUR |
1L AcrylaGel 30% |
|||
NAT1118 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 133.38 EUR |
1L SequaGel XR |
|||
NAT1162 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 119.7 EUR |
1L TBE 10X |
|||
NAT1196 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 44 EUR |
1L TBE 5X |
|||
NAT1200 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 36.82 EUR |
1L Denaturation Solution |
|||
NAT1232 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 48.79 EUR |
1L Neutralization Solution |
|||
NAT1234 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 48.79 EUR |
1L Scotts Tapwater |
|||
NAT1342 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 34.54 EUR |
1L Oxosol 306 |
|||
NAT1382 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 86.64 EUR |
Dosing Bottle 1L |
|||
CLE2020 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 8.16 EUR |
Arsenite 0.05M 1L |
|||
SA2005F | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 101.46 EUR |
Stainless Container 1L |
|||
SAM1111 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 263.34 EUR |
Scoop 1L Polypropylene |
|||
SCO1016 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 28.16 EUR |
GL45 Flask - 1L |
|||
FLA1006 | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 241.68 EUR |
Flask Filter 1L |
|||
FLA7724 | Scientific Laboratory Supplies | PK5 | 282.12 EUR |
Flask Receiving 1L |
|||
EVA5012 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 204.06 EUR |
Hellmanexcleaning concentrate 1l |
|||
CEL2106 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 79.8 EUR |
Growth Medium 1L |
|||
79555 | BPS Bioscience | 500 ml | 650 EUR |
CELL EXPANSION BAG, 1L |
|||
91-200-85 | CORNING | 1/pk | 134.4 EUR |
SLINGSHOT-1L Conjugated Antibody |
|||
C48407 | SAB | 100ul | 476.4 EUR |
InstantBlue 1L (Instant Blue) |
|||
ISB1L | Expedeon | 1L bottle | 198 EUR |
Sodium Edetate 0.1M 1L |
|||
3005900 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 49.02 EUR |
Sodium Methoxide 0.1M 1L |
|||
3007100 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 139.08 EUR |
1L Corning Storage Bottle |
|||
431734 | Scientific Laboratory Supplies | PK24 | 296.4 EUR |
1L TAE Buffer 10x |
|||
46-010-CM | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 243.96 EUR |
1L Millers LB Broth |
|||
46-050-CM | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 223.44 EUR |
0.1N Sulphuric Acid 1L |
|||
2053 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 44.69 EUR |
Euro Pharmacopoeia Reagent 1L |
|||
1045901 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 283.86 EUR |
Ph Buffer 7 1L |
|||
1070 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 29.64 EUR |
1L DMEM Dulbecos Modification |
|||
15-017-CM | Scientific Laboratory Supplies | PK6 | 215.46 EUR |
Sepharose CL-2B 1L |
|||
17014001 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 882.36 EUR |
Sepharose CL-4B 1L |
|||
17015001 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 982.68 EUR |
Sepharose CL-6B 1L |
|||
17016001 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 982.68 EUR |
Beaker Low Form 1L |
|||
BEA11200 | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 156.18 EUR |
Bottle Alpha 1L Glass |
|||
BOT2030 | Scientific Laboratory Supplies | PK20 | 82.63 EUR |
Bottle Alpha 1L Amber |
|||
BOT2050 | Scientific Laboratory Supplies | PK20 | 91.88 EUR |
Kartell Jug 1L PP |
|||
JUG1002 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 9.12 EUR |
Jug StSteel 1L Graduated |
|||
JUG2002 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 42.18 EUR |
1L DEPC Treated Water |
|||
NAT1104 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 69.54 EUR |
1L Bis-AcrylaGel 2% |
|||
NAT1122 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 60.42 EUR |
1L SequaGel UreaGel Concentrate |
|||
NAT1134 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 109.44 EUR |
1L SequaGel UreaGel-6 |
|||
NAT1146 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 103.74 EUR |
1L SequaGel UreaGel-8 |
|||
NAT1150 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 103.74 EUR |
1L SequaGel UreaGel Diluent |
|||
NAT1154 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 49.93 EUR |
1L TAE Buffer 50X |
|||
NAT1222 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 101.46 EUR |
1L SSC Buffer 20X |
|||
NAT1224 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 44 EUR |
1L EDTA 0.5M Solution |
|||
NAT1282 | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 140.22 EUR |
Decon Neutracon Detergent 1L |
|||
CLE1000 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 11.4 EUR |
Decon 90 Detergent 1L |
|||
CLE1020 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 13.68 EUR |
Sharpsbin 1L Orange Lid |
|||
DD479O | Scientific Laboratory Supplies | PK30 | 60.42 EUR |
1L Sodium Hydroxide Solution |
|||
S25001SP | Scientific Laboratory Supplies | 1L | 49.02 EUR |
GL45 Baffled Flask - 1L |
|||
FLA1016 | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 259.92 EUR |
×
Używając proteomiki obejmującej dwuwymiarową elektroforezę żelową , immunoblotting z przeciwciałem pan-fosfotyrozynowym i spektrometrię mas MALDI, zidentyfikowaliśmy izoformę 2 kinazy pirogronianowej (PKM2) jako główne białko ufosforylowane tyrozyny włączone podczas NUH. Rozszerzyliśmy to odkrycie na próbkach z myszy transgenicznych, ludzkich linii komórkowych UC i UC, ustalając, że PKM2, ale nie jego splicingowa odmiana PKM1, ulega nadekspresji w UC niskiego i, co ważniejsze, wysokiego stopnia UC.
W naciekającym mięśniówkę UC PKM2 znajdowała się w jednej lokalizacji z cytokeratynami 5 i 14, markerami progenitorowymi UC. Swoiste hamowanie PKM2 przez siRNA lub shRNA hamowało proliferację komórek UC poprzez zwiększoną apoptozę, autofagię i odpowiedź na niesfałdowane białka. Wyniki te silnie sugerują, że PKM2 odgrywa ważną rolę w genezie nieinwazyjnych i inwazyjnych raków urotelialnych o niskim stopniu złośliwości.
Tagi: exosome cd63 exosome companies exosome definition exosome detection exosome diagnostics exosome drug delivery exosome dx urine test for prostate cancer exosome extraction exosome flow cytometry exosome isolation exosome isolation kit exosome labeling exosome marker exosome review exosome rna exosome size exosome tem exosome theory exosome therapy exosomedx exosomedx test exosomes for hair loss exosomes meaning exosomes treatment