• 10 czerwca, 2022

Podwójna rola imidazolu jako aktywatora inhibitora β-glukozydazy ze słodkich migdałów (Prunus dulcis).

Oznaczono aktywność β-glukozydazy Prunus dulcis (ze słodkich migdałów) kosztem p-nitrofenylo-β-d-glukopiranozydu przy pH 6, zarówno w stanie stacjonarnym, jak i przedstacjonarnym. Stosując surowe preparaty enzymatyczne zaobserwowano konkurencyjne hamowanie przez 1-5 mM imidazol w obu badanych warunkach kinetycznych. Jednakże, gdy do mieszanin reakcyjnych dodano imidazol w stężeniu 0,125-0,250 mM, wykryliśmy znaczną aktywację enzymu. W celu dalszego zbadania tego efektu wywieranego przez imidazol, β-glukozydazę oczyszczono do jednorodności. Wyizolowano dwie izoformy enzymu, tj. monomer pełnej długości i dimer zawierający podjednostkę pełnej długości i skróconą.
  1. Stwierdzono, że dimeryczna β-glukozydaza działa znacznie lepiej niż enzym monomeryczny, niezależnie od warunków kinetycznych stosowanych do oznaczenia aktywności enzymu. Ponadto stwierdzono, że wrażliwość obu izoform na imidazol różni się.
  2. Chociaż rzeczywiście stwierdzono, że enzym monomeryczny jest stosunkowo niewrażliwy na imidazol, zaobserwowano, że dimeryczna β-glukozydaza jest znacząco aktywowana przez 0,125-0,250 mM imidazol w warunkach stanu wstępnego.
  3. Ponadto testy w stanie stacjonarnym wykazały, że dodanie 0,125 mM imidazolu do mieszanin reakcyjnych zwiększa Km enzymu dimerycznego z 2,3 do 6,7 mM. Proponuje się, że aktywacja dimeru β-glukozydazy przez imidazol odbywa się poprzez przejście konformacyjne pozycjonujące enzym w kierunku sprawnej katalizy.

Synteza arabinoamidyny i jej hamowanie w kierunku  β – glukozydazy  ( słodkie  migdały ) w porównaniu z biblioteką galaktonoamidyn.

Mając na celu opracowanie silnych inhibitorów β-glukozydaz, zbadano małą bibliotekę galaktonoamidyn i jedną arabinoamidynę wyprowadzoną analogicznie jako inhibitory β-glukozydazy ze słodkich migdałów. Wykazano, że pięcioczłonowy glikon w arabinoamidynie oddziałuje z donorem protonów w miejscu aktywnym enzymu zatrzymującego, ale nie z nukleofilem. W przeciwieństwie do tego, odpowiednia galaktonoamidyna z sześcioczłonowym glikonem i identycznym aglikonem oddziałuje z obydwoma promującymi hydrolizę aminokwasami w miejscu aktywnym i hamuje enzymatyczną hydrolizę β-glukozydów w zakresie niskich stężeń nanomolowych. Chociaż oba inhibitory są konkurencyjne, ich zdolność hamowania jest ponad 37 000 razy różna.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.